MS培养基的配制过程及要点?

目录


ms培养基的配制
培养基母液的配制和保存
配制培养液
溶化琼脂
培养基的分装
高压灭菌









ms培养基的配制编辑本段
植物组织培养中常用的一种培养基是ms培养基。ms培养基的配制包括以下步骤。
培养基母液的配制和保存 ms培养基含有近30种营养成分，为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量，可将培养基中的各种成分，按原量的20倍或200倍分别称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做培养基母液。这样每次使用时，取其总量的1/20(50 ml)或1/200(5 ml)，加水稀释，制成培养液。现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出，供配制时使用。
大量元素(母液ⅰ) mg／l
nh4no3 33 000
kno3 38 000
cacl2·2h2o 8 800
mgso4·7h2o 7 400
kh2po4 3 400
微量元素(母液ⅱ)
ki 166
h3bo3 1 240
mnso4·4h2o 4 460
znso4·7h2o 1 720
na2moo4·2h2o 50
cuso4·5h2o 5
cocl2·6h2o 5
铁盐(母液ⅲ)
feso4·7h2o 5 560
na2-edta·2h2o 7 460
有机成分(母液ⅳ)
ⅳa
肌醇 20 000
ⅳb
烟酸 100
盐酸吡哆醇(维生素b6) 100
盐酸硫胺素(维生素b1) 100
甘氨酸 400
以上各种营养成分的用量，除了母液ⅰ为20倍浓缩液外，其余的均为200倍浓缩液。
培养基母液的配制和保存编辑本段
ms培养基含有近30种营养成分，为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量，可将培养基中的各种成分，按原量的20倍或200倍分别称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做培养基母液。这样每次使用时，取其总量的1/20(50 ml)或1/200(5 ml)，加水稀释，制成培养液。现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出，供配制时使用。
大量元素(母液ⅰ) mg／l
nh4no3 33 000
kno3 38 000
cacl2·2h2o 8 800
mgso4·7h2o 7 400
kh2po4 3 400
微量元素(母液ⅱ)
ki 166
h3bo3 1 240
mnso4·4h2o 4 460
znso4·7h2o 1 720
na2moo4·2h2o 50
cuso4·5h2o 5
cocl2·6h2o 5
铁盐(母液ⅲ)
feso4·7h2o 5 560
na2-edta·2h2o 7 460
有机成分(母液ⅳ)
ⅳa
肌醇 20 000
ⅳb
烟酸 100
盐酸吡哆醇(维生素b6) 100
盐酸硫胺素(维生素b1) 100
甘氨酸 400
以上各种营养成分的用量，除了母液ⅰ为20倍浓缩液外，其余的均为200倍浓缩液。
上述几种母液都要单独配成1 l的贮备液。其中，母液ⅰ、母液ⅱ及母液ⅳ的配制方法是：每种母液中的几种成分称量完毕后，分别用少量的蒸馏水彻底溶解，然后再将它们混溶，最后定容到1 l。
母液ⅲ的配制方法是：将称好的feso4·7h2o和na2-edta·2h2o分别放到450 ml蒸馏水中，边加热边不断搅拌使它们溶解，然后将两种溶液混合，并将ph调至55，最后定容到1 l，保存在棕色玻璃瓶中。
各种母液配完后，分别用玻璃瓶贮存，并且贴上标签，注明母液号、配制倍数、日期等，保存在冰箱的冷藏室中。
ms培养基中还需要加入2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-d)、萘乙酸(naa)、6苄基嘌呤(6ba)等植物生长调节物质，并且分别配成母液(01 mg/ml)。其配制方法是：分别称取这3种物质各10 mg，将2，4-d和naa用少量(1 ml)无水乙醇预溶，将6ba用少量(1 ml)的物质的量浓度为0.1 mol/l的naoh溶液溶解，溶解过程需要水浴加热，最后分别定容至100 ml，即得质量浓度为01 mg/ml的母液。
配制培养液编辑本段
用量筒或移液管从各种母液中分别取出所需的用量：母液ⅰ为50 ml，母液ⅱ、ⅲ、ⅳa和ⅳb各5 ml。再取2，4d 5 ml、naa 1 ml，与各种母液一起放入烧杯中。
配制培养液时应注意：①在使用提前配制的母液时，应在量取各种母液之前，轻轻摇动盛放母液的瓶子，如果发现瓶中有沉淀、悬浮物或被微生物污染，应立即淘汰这种母液，重新进行配制；②用量筒或移液管量取培养基母液之前，必须用所量取的母液将量筒或移液管润洗2次；③量取母液时，最好将各种母液按将要量取的顺序写在纸上，量取1种，划掉1种，以免出错。
溶化琼脂编辑本段
用粗天平分别称取琼脂9 g、蒸糖30 g，放入1 000 ml的搪瓷量杯中，再加入蒸馏水750 ml，用电炉加热，边加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈半透明状。然后再将配好的混合培养液加入到煮沸的琼脂中，最后加蒸馏水定容至1 000 ml，搅拌均匀。
需要注意的是，在加热琼脂、制备培养基的过程中，操作者千万不能离开，否则沸腾的琼脂外溢，就需要重新称量、制备。此外，如果没有搪瓷量杯，可用大烧杯代替。但要注意大烧杯底的外表面不能沾水，否则加热时烧杯容易炸裂，使溶液外溢，造成烫伤。
调ph 用滴管吸取物质的量浓度为1 mol/l的naoh溶液，逐滴滴入溶化的培养基中，边滴边搅拌，并随时用精密的ph试纸(54～70)测培养基的ph，一直到培养基的ph为58为止(培养基的ph必须严格控制在58)。
培养基的分装编辑本段
溶化的培养基应该趁热分装。分装时，先将培养基倒入烧杯中，然后将烧杯中的培养基倒入锥形瓶(50 ml或100 ml)中。注意不要让培养基沾到瓶口和瓶壁上。锥形瓶中培养基的量约为锥形瓶容量的1/5～1/4。每1 000 ml培养基，可分装25～30瓶。
培养基分装完毕后，应及时封盖瓶口。用2块硫酸纸(每块大小约为9 cm×9 cm)中间夹1层薄牛皮纸封盖瓶口，并用线绳捆扎。最后在锥形瓶外壁贴上标签。
高压灭菌编辑本段
培养基的高压灭菌包括以下几个步骤。
第一，码放锥形瓶。将装有培养基的锥形瓶直立于金属小筐中，再放入高压蒸气灭菌锅内。如果没有金属小筐，可以在两层锥形瓶之间放一块玻璃板隔开。
第二，放置其他需要灭菌的物品。将其他需要灭菌的物品也放入高压蒸气灭菌锅内，如装有蒸馏水的锥形瓶、带螺口盖的玻璃瓶、烧杯、广口瓶(以上物品都要用牛皮纸封口)，用牛皮纸包裹的培养皿、剪刀、解剖刀、镊子、滤纸、铅笔等。
第三，灭菌。待需要灭菌的物品码放完毕，盖上锅盖。在98 kpa、121.3 ℃下，灭菌20 min。
灭菌后取出锥形瓶，让其中的培养基自然冷却凝固。最好放置1 d后再使用。