类别:酶联免疫分析检测试剂盒

规格:96T/48T

包装:盒

检测原理:采用双抗夹心法

保质期:六个月

产品保存条件:2-8°C

应用范围:仅供科研研究实验使用

样品形式:血清/血浆/组织匀浆/细胞培养上清/其它生物液体(具体情况请咨询)

标本的采集及保存

1.血清:室温血液自然凝固10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存  过程 中  如有沉淀形成,应再次离心。

2.血浆:应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

3.尿液:用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。

4.细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/ 分)。仔细收集上清。  检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以 使细胞破坏并 放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

5.组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。

标本要求: 

1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

试剂盒组成:

48孔配制:

1. 说明书: 1份

2. 封板膜:  2片(48)

3. 密封袋:  1个

4  酶标包被板: 1×48 (2-8℃保存)

5. 标准品:    0.5ml×1瓶(2-8℃保存)

6. 标准品稀释液: 1.5ml×1瓶(2-8℃保存)

7. 酶标试剂:     3 ml×1瓶(2-8℃保存)

8. 样品稀释液: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)

9. 显色剂A液: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)

10 .显色剂B液:  3 ml×1瓶(2-8℃保存)

11 .终止液:3ml×1瓶(2-8℃保存)

12. 浓缩洗涤液:(20ml×20倍)×1瓶(2-8℃保存)

96孔配置:

1.  说明书:1份

2.  封板膜:2片(96)

3.  密封袋: 1个

4.  酶标包被板:1×96 (2-8℃保存)

5.  标准品:0.5ml×1瓶(2-8℃保存)

6.  标准品稀释液:1.5ml×1瓶(2-8℃保存)

7.  酶标试剂: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)

8.  样品稀释液: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)

9.  显色剂A液:3 ml×1瓶(2-8℃保存)

10. 显色剂B液:3 ml×1瓶(2-8℃保存)

11. 终止液:3ml×1瓶(2-8℃保存)

12. 浓缩洗涤液:(20ml×20倍)×1瓶(2-8℃保存)

需要自备的试剂和器材

1.37℃恒温箱。

2.标准规格酶标仪。

3.精密移液器及一次性吸头

4.蒸馏水,

5.一次性试管

6.吸水纸

操作步骤

1、标准品的稀释:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第一、第二孔中分别加标准品100μl,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为9mmol/L,6 mmol/L,3 mmol/L,1.5mmol/L, 0.75 mmol/L)。

2、加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3、温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4、配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。

5、洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6、加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

7、温育:操作同3。

8、洗涤:操作同5。

9、显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟. 

10、终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11、测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

洗板方法

手工洗板方法:甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内,浸泡1-2分钟。根据需要,重复此过程数次。

自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。

注意事项:

试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间*控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

请每次测定的同时做标准曲线,*做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请*乘以总稀释倍数(×n×5)。

封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

底物请避光保存。

严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

本试剂不同批号组分不得混用。

如与英文说明书有异,以英文说明书为准。

计算:

以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,    

在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD      

值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释      

倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标      

准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值      

代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释      

倍数,即为样品的实际浓度。  

检测范围、 OD值:

具体请咨询在线客服,或者来电索要详细说明书!

 

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